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beider Gene sdmB und sdmC angenommen. Die Kontrolle der Klone erfolgte über

eine Southern-Blot-Analyse. Die Fragmente für die radioaktiven Markierungen

wurden für die Sonde IV mit den Oligonukleotide corsenachfw und metIvorrv, für die

Sonde V mit den Oligonukleotide pacsondefw und pacsonderv und für die Sonde VI

mit den Oligonukleotide metIInachfw und metIInachrv über eine PCR gewonnen. Die

Sonde IV bindet an die intergene Region zwischen den Genen sdmA und sdmB, die

Sonde VI an das 3´-Ende von sdmC und die Sonde V an das Gen pacN (oberer Teil

der Abb. 15 und 16).

Für den Nachweis der Deletion von sdmA wurde die chromosomale DNA der

Mutante und des Wildtyps mit den Restriktionsendonukleasen Acc I und Nco I

behandelt und in einer Southern-Blot-Analyse untersucht. Dabei betrug die

Hybridisierungstemperatur für alle verwendeten Sonden 55°C. Die Schnittstellen und

die Größen der zu erwartenden Fragmente sind im oberen Teil der Abb. 15 für den

Wildtyp und die Deletionsmutante V1

∆

sdmA dargestellt. Nach der Hybridisierung mit

der Sonde V bzw. IV ergab sich in der Autoradiographie wie erwartet für den Wildtyp

kein bzw. ein Signal von ca. 3200 bp und für die Mutante ein Signal von 1200 bzw.

2600 bp (Abb. 15A und B).

Es kann aus dieser Analyse geschlossen werden, dass das Gen sdmA tatsächlich

ausgetauscht wurde.

Für den Nachweis der Deletion von sdmB, sdmC oder beider Gene sdmB und sdmC

wurde chromosomale DNA mit Eco RI und Nco I behandelt und ebenfalls in einer

Southern-Blot-Analyse untersucht. Dabei betrug die Hybridisierungstemperatur für

alle verwendeten Sonden ebenfalls 55°C. Die Schnittstellen sind schematisch im

oberen Teil der Abb. 16 dargestellt. Wie zu erwarteten war, erhielt man nach der

Hybridisierung mit der Sonde V in der Autoradiographie für den Wildtyp kein Signal,

für die Mutante V1

∆

sdmB bzw. −C ein Signal von ca. 1400 bzw. 2800 bp und für die

Doppelmutante von ebenfalls 1400 bp (Abb. 16A, Spuren 1-4). Mit der Sonde IV

ergaben sich Signale von ca. 4500 bp für den Wildtyp, von 2500 bp für V1

∆

sdmC

und von ca. 1400 bp für V1

∆

sdmB und −BC . (Abb. 16B, Spuren 1-4). Mit der

Sonde VI wurden in der Autoradiographie Signale von 4500 bp für den Wildtyp, von

ca. 3400 für die Mutante V1

∆

sdmB bzw. von 2500 bp für V1

∆

sdmC und -BC

detektiert (Abb. 16C, Spuren 1-4).

Eine Deletion der Gene sdmB, sdmC oder der beiden Gene sdmBC wurde mit dieser

Southern-Blot-Analyse bestätigt.

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