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5 Ergebnisse

Methan [nmol]

500

Methanol

DMS

DMA

TMA

450

400

350

300

250

200

150

100

Zeit [min]

Abb. 13: Gaschromatographische Methanmessungen

Für die Methanmessungen wurde je 1 ml einer Zellsuspension, OD

600

= 0,8, zu einer

Endkonzentration von 10 mM mit TMA, DMA, MMA, DMS oder Methanol versetzt und mit H

überschichtet. Die Proben für die Messungen wurden in Zeitabständen genommen. Als

Positivkontrolle diente eine Zellsuspension in einer H

/CO

-Atmosphäre, als Negativkontrolle eine

Zellsuspension ohne Substrat, die in einer H

-Atmosphäre inkubiert wurde.

5.9 Die Konstruktion von Deletionsmutanten der Gene sdmA,

sdmB und sdmC

Durch den vorangegangenen Versuch konnte dem Corrinoid-Protein und den beiden

Methyltransferasen aus M. voltae eine mögliche Funktion nicht zugewiesen werden.

Für weitere Untersuchungen war es daher sinnvoll zunächst Deletionsmutanten der

Gene sdmA, sdmB und sdmC herzustellen. Dabei wurden die jeweiligen Gene durch

den Resistenzmarker pacN ersetzt, der für die Puromycin-N-Acetyltransferase

kodiert und eine Selektion der Mutanten erlaubt. Der Terminator für pacN stammte

aus dem Gen der Methyl-Coenzym M-Reduktase, der Promotor aus dem

S-layer-Gen (Kansy et al., 1994; Konisky et al., 1994; Müller et al., 1985). Das

Schema der Deletionsmutagenese ist zusammenfassend nur für sdmA in Abb. 14

1 2 ... 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 ... 100 101

Brak uwag

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