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4 Material und Methoden

4.9 Molekularbiologische Methoden

4.9.1 Fällung von DNA/RNA mit Isopropanol

Fällung von DNA bzw. RNA mit Isopropanol erfolgte nach Ausubel et al. (1996).

4.9.2 Phenol/Chloroform-Extraktion

Die Extraktion von DNA mit Phenol/Chloroform aus Lösungen erfolgte nach Ausubel

et al. (1996).

4.9.3 Auftrennung von DNA in Agarosegelen

Die Auftrennung von DNA erfolgte in Agarosegelen in 40 mM Tris/Acetat, pH 8,0,

1 mM EDTA nach Sambrook und Russell (2001). Als Größenstandard wurde der

GenRuler

DNA Ladder Mix (MBI Fermentas, St. Leon-Rot) nach Angaben des

Herstellers verwendet. Die DNA wurde mit einer 0,2 % (w/v)

Ethidiumbromidlösung gefärbt und nach kurzem Wässern unter UV-Licht

(λ = 302 nm) sichtbar gemacht.

4.9.4 Konzentrationsbestimmungen von Nukleinsäuren

Die Quantifizierung von Nukleinsäuren erfolgte spektrophotometrisch bei einer

Wellenlänge von 260 nm (Ausubel et al., 1996) oder anhand der

Mengenabschätzung in Agarosegelen. Hierzu wurde die zu bestimmende Probe

neben einer bekannten DNA-Menge eines Größenstandards aufgetrennt und die

Probenmenge im Vergleich zum Standard a/jointfilesconvert/481994/bgeschätzt. Als Standard diente mit Pst I

behandelte DNA des Bakteriophagen λ.

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Brak uwag

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