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Inhaltsverzeichnis

1 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS_________________________________1

2 ZUSAMMENFASSUNG ______________________________________3

3 EINLEITUNG_______________________________________________5

4 MATERIAL UND METHODEN ________________________________16

4.1 CHEMIKALIEN _________________________________________________ 16

4.2 G

ASE_______________________________________________________ 16

4.3 R

ADIOISOTOPE ________________________________________________ 16

4.4 VERWENDETE STÄMME __________________________________________ 16

4.5 O

LIGONUKLEOTIDE _____________________________________________ 17

4.6 P

HAGENBANK _________________________________________________ 19

4.7 P

LASMIDE ___________________________________________________ 19

4.7.1 Konstruktion der Plasmide pNPAC-sdmA, -sdmB, -sdmC und -sdmBC 20

4.8 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN ___________________________________ 23

4.8.1 Kultivierung von Methanococcus voltae_________________________ 23

4.8.2 Kultivierung von Escherichia coli ______________________________ 23

4.9 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN _______________________________ 24

4.9.1 Fällung von DNA/RNA mit Isopropanol _________________________ 24

4.9.2 Phenol/Chloroform-Extraktion ________________________________ 24

4.9.3 Auftrennung von DNA in Agarosegelen _________________________ 24

4.9.4 Konzentrationsbestimmungen von Nukleinsäuren_________________ 24

4.9.5 Reinigung chromosomaler DNA aus M. voltae ___________________ 25

4.9.6 Präparation von Plasmid-DNA aus E. coli _______________________ 25

4.9.7 Polymerasekettenreaktion (PCR)______________________________ 25

4.9.8 Klonierung von PCR-Produkten, Restriktion und Ligation von DNA ___ 26

4.9.9 Elution von DNA aus Agarosegelen____________________________ 26

4.9.10 Sequenzierung von DNA ____________________________________ 26

4.9.11 Primer Extension __________________________________________ 27

4.9.12 RT-PCR _________________________________________________ 28

4.9.13 Herstellung elektrokompetenter Zellen aus E. coli_________________ 28

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