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4 Ergebnisse

4.3 Ergebnisse der heterologen Expression der Untereinheiten MtrA und MtrH

Mit sämtlichen hergestellten Vektorkonstrukten (siehe Tabelle 3.1) wurden

Expressionstest durchgeführt, um die Abhängigkeit der Löslichkeit des Proteins von

den Wachstumsbedingungen zu überprüfen sowie eine Maximierung der

Proteinausbeute zu erreichen. Es wurden sowohl verschiedene Medien (LB-, TB-

und M9-Minimalmedium), verschiedene Temperaturen (25-37 °C) als auch

unterschiedliche Konzentrationen zur Induktion (IPTG: 0,1-1 mM, AHT: 2-200 ng/mL)

getestet (siehe Abschnitt 3.3.4).

Tabelle 4.3 gibt eine Übersicht über die Ergebnisse der durchgeführten

Expressionsversuche zur Produktion der rekombinanten Untereinheiten MtrA und

MtrH in E. coli. Bei MtrA aus M. jannaschii war die lösliche Expression abhängig von

der Temperatur und der zur Induktion verwendeten IPTG-Konzentration. So wurde

vollständiges MtrA mit C-terminaler Transmembranhelix (MJMtrA1) in LB-Medium bei

37 °C Anzuchttemperatur löslich, des-[229-246]-MtrA (MJMtrA2) jedoch nur teilweise

löslich und des-[225-246]-MtrA (MJMtrA3) vollständig unlöslich produziert. Durch

eine Absenkung der Temperatur nach der Induktion und eine Verringerung der IPTG-

Konzentration wurden MJMtrA2 und MJMtrA3 jedoch ebenfalls löslich exprimiert.

MtrA aus M. kandleri konnte bei den in Tabelle 4.3 aufgeführten Bedingungen

zumindest teilweise als lösliches Protein in E. coli produziert werden.

MtrH wurde unabhängig vom Ursprungsorganismus, den

Wachstumsbedingungen oder dem verwendeten Induktionssystem (lac-Operon oder

tet-Repressor) immer unlöslich in Einschlusskörperchen exprimiert.

Bei der Co-Expression von MtrA3 und MtrH aus M. jannaschii zeigte sich

ebenfalls, dass diese immer als Einschlusskörperchen produziert wurden. Hier

konnte auch durch eine Änderung der Anzuchtbedingungen kein lösliches Protein

erzeugt werden.

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