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5 Diskussion

5.4 Der N

-Methyl-H

MPT:Coenzym M-Methyltransferasekomplex aus

M. marburgensis

5.1.1 Isolierung und Reinigung des Mtr-Komplexes

Im Rahmen dieser Arbeit gelang die Verbesserung und Vereinfachung der

Isolierung und Reinigung des Mtr-Komplexes aus M. marburgensis unter aeroben

Bedingungen. Eine entscheidende Hürde hierbei war, das Abdissoziieren der

hydrophilsten, 34 kDa großen Untereinheit MtrH vom restlichen Komplex zu

kontrollieren. Zwei Strategien wurden hierzu gewählt, zum einen die möglichst

schonende Präparation des kompletten, acht Untereinheiten umfassenden

Komplexes MtrA-H, zum anderen die Präparation des Enzymkomplexes MtrA-G

unter möglichst vollständiger Abtrennung der Untereinheit MtrH.

Das von Gärtner et al. (56) für die anaerobe Reinigung etablierte Protokoll wurde

modifiziert, indem die Zellen im Hochdruckhomogenisator aufgeschlossen wurden.

Dadurch konnte der Gehalt an MtrH im Komplexverbund etwas erhöht werden. Bei

der sich anschließenden Ionenaustauschchromatographie auf DEAE-Sepharose

zeigte sich eine Auftrennung in verschiedene Fraktionen. Diejenigen, die zwar den

Mtr-Komplex, jedoch im Vergleich zu den übrigen Untereinheiten wenig MtrH

enthielten, diejenigen, welche alle acht Untereinheiten in gleicher Menge

beinhalteten und jene, welche neben dem Mtr-Komplex eine zunehmende Menge an

anderen Proteinen umfassten. An der Anzahl der Fraktionen mit wenig MtrH sowie

deren Gesamtproteingehalt konnte die Qualität der Membranpräparation a/jointfilesconvert/483107/bgelesen

werden. Bei der folgenden Ionenaustauschchromatographie auf Q-Sepharose traten

wiederum einige Fraktionen mit im Vergleich zu den übrigen Untereinheiten weniger

MtrH auf. Die abschließende Gelfiltration zeigte, dass MtrA-H größtenteils als

monodisperse Probe vorlag.

Vergleicht man die Reinigung unter anaeroben Bedingungen (56, 65) mit der in

dieser Arbeit durchgeführten Präparation, fällt auf, dass bei letzterer die

Salzkonzentration zur Elution von MtrA-H bei der säulenchromatographischen

Reinigung insgesamt etwas höher lag. Die in der Literatur beschriebene vollständige

Abtrennung von MtrH während der Ionenaustauschchromatographie auf

Q-Sepharose konnte in dieser Arbeit nicht bestätigt werden. Die Anzahl an

Fraktionen mit wenig MtrH variierte von Präparation zu Präparation stark, nur die Art

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Brak uwag

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