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4 Ergebnisse

4.2.3 Kristallisation

Für die Kristallisationsversuche des Gesamtkomplexes MtrA-H lag dieser im

Kristallisationspuffer (50 mM MOPS/KOH pH 7,0, 10 mM MgCl

, 100 mM

Ammoniumsulfat, 10 % (w/v) Glycerin, 2 mM DTT, 0,1 % LM) mit einer Konzentration

von 22 mg/mL vor. Es wurde nach der sitting drop-Methode in Kristallisationsplatten

mit 96 Vertiefungen verfahren. Als Reservoirlösung wurden je 100 µL der

JB-Screens 1-10 eingesetzt. Pro Ansatz wurden je 0,3 µL Proteinlösung und

Reservoirlösung gemischt und die Platten bei 18 °C gelagert. Auch nach mehreren

Wochen wurden keine Kristalle gefunden.

4.2.4 Elektronenmikroskopische Einzelpartikelmessung

Die wie in Abschnitt 3.7.1 beschrieben mit Negativfärbung aufgenommen

Mikrographen des Mtr-Komplexes (MtrA-H) wurden zur Beurteilung der Homogenität

der Probe verwendet (Abbildung 4.7). Darüber hinaus wurde aus diesen Aufnahmen

von Frau Ming Yang (Max-Planck-Institut für Biophysik, Frankfurt) mittels der

Random-conical-tilt-Methode ein erstes dreidimensionales Modell erstellt, dass für

weitere Rekonstruktionen als Startmodell diente (133).

1 2 ... 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 ... 143 144

Brak uwag

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